TECNICA DE CULTIVO DE TEJIDOS



TECNICA DE CULTIVO DE TEJIDOS



El cultivo de la mezcla es una tecnica basada en colocar un fragmento de planta en un recipiente ayudado con soluciones nutritivas artificiales y hormonas vegetales; para propagarla en condiciones o en un medio estéril, es decir en un medio libre de microorganismos (limpio). Cada fragmento origina una planta idéntica a la que se tomó el fragmento, aunque puede ser modificada genéticamente para tener variedades artificiales.

HECHOS HISTORICOS

En el siguiente cuadro se muestran algunos de los hechos históricos más relevantes en el desarrollo de las técnicas y métodos de cultivo de tejidos

1885
  • Roux Consiguió mantener durante días células de embrión de pollo en una solución salina
1907
  • Harrison Utilizó técnicas de estudio in vitro para el estudio de fenómenos in vivo, y demostró el crecimiento de fibras nerviosas en cultivo
1910
  • Burrows Empleó plasma de pollo para nutrir los cultivos embrionarios de pollo 

1913

  • Carrel Demostró la posibilidad de mantener en cultivo células de embrión de pollo, en
    condiciones de asepsia, durante un tiempo superior a la vida del animal

1916
  • Rous y Jones Utilizaron por primera vez extractos enriquecidos en tripsina para disociar células de los tejidos

1948
  • Sanford y cols. Demuestran la formación de clones celulares

1952

  • Gey y cols. Establecen la primera línea celular humana contínua, las células
  • HeLa Levi-Montalcini y cols. Determinan que el factor de crecimiento nervioso (NGF) estimula el crecimiento de
    axones en cultivo

1954

  • Abercrombie y cols. Observan la inhibición de crecimiento por contacto en fibroblastos

1955
  • Eagle Desarrolla medios definidos y describe factores de adhesión

1958
  • Temin y Rubin Desarrollan un ensayo cuantitativo para la infección de células de pollo en cultivo por el virus del sarcoma de Rous

1961
  • Hayflick y Moorehead Describen la vida finita de las células humanas diploides

1962
  • Buonassisi Publica los métodos para mantener células diferenciadas

1964
  • Littlefield Introdice el medio HAT para el crecimiento selectivo de células híbridas, y desarrolla las técnicas de fusión celular

1965
  • Ham Utiliza el primer medio definido libre de suero.
  • Harris y Watkins Producen el primer heterocarion de células de mamífero por la fusión inducida por virus de células humanas y de ratón

1968
  • Yaffe Estudia la diferenciación de mioblastos normales in vitro

1969
  • Augusti-Tocco y Sato Establecen la primera línea celular estable de neuroblastoma, línea de celulas diferenciada

1975
  • Köhler y Milstein Establecen la primera línea celular productora de anticuerpos monoclonales

1976
  • Sato y cols. Publican una serie de trabajos que demuestran las distintas necesidades de hormonas y factores de crecimiento que precisan diferentes líneas celulares

1977
  • Wigler y Axel Desarrollan un método eficiente para introducir una copia simple de genes de mamífero en células en cultivo

1986
  • Martín y Evans Aíslan y cultivan células madre embrionarias pluripotenciales del ratón

1998
  • Thomson y Gearhart Aíslan células madre embrionarias humanas

Tipos de cultivos de tejidos

Cultivo de órganos:
En este tipo de cultivo la organización tridimensional
del órgano in vivo se mantiene, aunque sólo sea parcialmente, y mantiene todas o algunas de las características histológicas del tejido original. El órgano o porción del mismo se mantiene en un medio líquido del que extrae los nutrientes y al que elimina los desechos metabólicos. Los diferentes tipos de células se mantienen en su forma diferenciada y constituye una buena réplica del órgano original. Pero, sin embargo, generalmente no permite la propagación, ya que el crecimiento de células se produce únicamente en la periferia. Normalmente este tipo de cultivo es difícil de mantener durante un tiempo prolongado debido a las diferencias potenciales de crecimiento de los distintos tipos celulares que constituyen el órgano. La falta de propagación tiene como consecuencia que para repetir el experimento se necesite nuevo material, por lo que se produce cierta heterogeneidad de muestras.

Explantes primarios:
Constituidos por fragmentos pequeños de tejidos u órganos que se adhieren a una superficie en la que generalmente crecen las células más periféricas del explante. Un cultivo se denomina cultivo primario cuando las células o tejidos procedentes de un ser vivo crecen sin
haber pasado previamente por una fase de crecimiento in vitro. Un cultivo se denomina cultivo secundario cuando procede de una fase previa de crecimiento in vitro.

Cultivo de células:
Este tipo de cultivo está formado por células dispersas disgregadas de un tejido vivo, de un cultivo primario, o de una línea celular, mediante distintos sistemas mecánicos, químicos o enzimáticos. Las células crecen en suspensión o adheridas a una superficie. Generalmente son cultivos que contienen un único tipo de célula y éstas suelen ser homogéneas genéticamente. Es el tipo de cultivo más utilizado en la actualidad debido a su capacidad de propagación, es decir de crecimiento mantenido.
Hablamos de cultivos histotípicos cuando las células son reagrupadas para recrear una estructura tridimensional parecida al tejido original

• Cultivos de alta densidad sobre un pocillo filtro
• Perfusión y sobrecrecimiento de una monocapaen frasco o en disco
• Reagregación en suspensión sobre agar o en gravedad cero real o simulada
• Infiltración de una matriz tridimensional como el gel de colágeno
Un cultivo organotípico implica los mismos procedimientos anteriores pero combinando células de diferentes linajes que constituyen un órgano.


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